利用百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture
進(jìn)行動(dòng)物組織樣品的實(shí)時(shí)熒光定量PCR
時(shí)間：2009年8月10日
在對(duì)不同動(dòng)物組織樣品進(jìn)行特定基因的mRNA水平檢測(cè)過(guò)程中，實(shí)時(shí)熒光定量PCR以其安全、快速、靈敏等特點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)中占據(jù)著絕對(duì)優(yōu)勢(shì)。在使用此實(shí)驗(yàn)手段之初，實(shí)驗(yàn)室人員通常需要分別購(gòu)買熒光染料以及酶體系等用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR，通過(guò)人為配置復(fù)雜體系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。這種完全依靠人為手工配置的過(guò)程，對(duì)于極度靈敏的實(shí)時(shí)PCR而言是難以令人滿意的。實(shí)驗(yàn)試劑質(zhì)量的參差不齊和實(shí)驗(yàn)人員的訓(xùn)練水平都會(huì)影響實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，有時(shí)甚至?xí)?dǎo)致實(shí)驗(yàn)的失敗和珍貴樣品的浪費(fèi)，因此使用商品化實(shí)時(shí)定量PCR的mixture逐漸成為趨勢(shì)。進(jìn)口的實(shí)時(shí)定量PCR mixture大多價(jià)格昂貴，對(duì)于消耗量巨大的實(shí)驗(yàn)室是難以負(fù)擔(dān)的，故國(guó)產(chǎn)的實(shí)時(shí)定量PCR mixture是實(shí)驗(yàn)室的首選。
百泰克公司的2*SYBR real-time PCR premixture在我室目前進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究中使用狀況良好，試劑質(zhì)量穩(wěn)定（我個(gè)人曾經(jīng)最多反復(fù)凍融過(guò)4次，實(shí)驗(yàn)效果也沒(méi)有受到影響），能夠快速地幫助實(shí)驗(yàn)人員得到所需實(shí)驗(yàn)結(jié)果。附圖為我室人員采用20ul體系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，如圖1所示，使用百泰克2*SYBR real-time PCR premixture進(jìn)行的實(shí)時(shí)定量PCR溶解曲線良好，背景干凈，產(chǎn)物單一特異；如圖2、3所示，使用百泰克2*SYBR real-time PCR premixture進(jìn)行的實(shí)時(shí)定量PCR得到的擴(kuò)增曲線平滑，背景低，起峰時(shí)間正常；如圖4所示，為實(shí)驗(yàn)后得到的結(jié)果統(tǒng)計(jì)。
此外，良好的實(shí)時(shí)結(jié)果亦取決于RNA質(zhì)量。百泰克公司的離心柱型總RNA提取試劑盒對(duì)于動(dòng)物組織樣品的RNA提取效果良好、性價(jià)比較高，是值得推薦的。如圖5所示，對(duì)于腎臟和肝臟這樣的組織，百泰克公司的RNApure高純總RNA快速提取試劑盒（離心柱型）（貨號(hào)：RP1201或RP1202）與invitrogen公司的TRIzol試劑提取有類似的效果，但對(duì)于胰腺這樣極其容易發(fā)生自溶，并且RNA又極易降解的組織，百泰克公司的離心柱型總RNA提取試劑盒提取的樣品幾乎沒(méi)有降解，具有極大的優(yōu)勢(shì)。
圖1：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得溶解曲線
圖2：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得擴(kuò)增曲線
圖3：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得擴(kuò)增曲線（Y軸放大）
圖4：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得結(jié)果統(tǒng)計(jì)
圖5： 動(dòng)物不同組織RNA提取的試劑比較
