循環(huán)腫瘤細胞（circulating tumor cells，CTCs）是指由實體腫瘤上脫落下來進入血液或者淋巴系統(tǒng)的腫瘤細胞。CTCs數(shù)量與癌癥發(fā)展進程和轉移密切相關[1-3]。大量臨床研究表明，對CTCs數(shù)量進行跟蹤監(jiān)控有助于癌癥早期診斷[4, 5]，預后判斷[6]和藥效評估[7, 8]。
圖1. CTCs示意圖
經(jīng)過大量的臨床研究，研究人員在許多惡性腫瘤（乳腺癌、結直腸癌、肺癌、前列腺癌等）中都發(fā)現(xiàn)了CTCs的存在。目前，臨床上對腫瘤的檢測有以下幾種常規(guī)方法：影像學診斷、內(nèi)窺鏡檢查和病理學診斷，與傳統(tǒng)檢測方法相比，CTC檢測有兩個明顯優(yōu)勢：（1）. CTCs檢測是非侵入式的，醫(yī)生或者研究人員只需要從患者體內(nèi)抽取少量的外周血（幾毫升左右），這一過程是無創(chuàng)的，而且也沒有任何副作用，同一患者能夠反復多次采集，不需要通過對患者進行手術或者穿刺等方式來獲取組織切片。（2）. 由于現(xiàn)在影像學等檢測技術的靈敏度和精度限制，CTCs能更快地發(fā)現(xiàn)腫瘤的動態(tài)變化情況，有助于對腫瘤患者進行預后判斷、復發(fā)風險預警和轉移情況監(jiān)控等。
目前，對CTCs的研究主要集中在早期篩查、輔助腫瘤分期、預后評估、個體化治療策略制定，療效及耐藥監(jiān)測、復發(fā)和轉移預警等方面。
人外周血循環(huán)腫瘤細胞差相富集試劑盒利用密度梯度離心法，從全血樣本中分離出外周血單個核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），再通過偶聯(lián)了抗人CD45單克隆抗體的免疫磁珠去除腫瘤病人PBMC細胞中的CD45+細胞，從而有效的富集了病人外周血標本的CTCs。本實驗過程中紅細胞的去除避免了低滲裂解法的使用，從而對富集的腫瘤細胞損傷降到最低，使獲得的靶細胞維持了良好的自然狀態(tài)及細胞形態(tài)，可以應用于后續(xù)一系列鑒定性研究。
免疫熒光細胞化學鑒定是通過Alexa Fluor 488熒光素標記的細胞角蛋白抗體（Alexa Fluor 488-anti-CK18）、PE標記的抗人CD45抗體（PE-anti-CD45）和DAPI對細胞進行免疫熒光染色，CK18表達陽性，CD45 表達陰性（DAPI+/CK18+/CD45-）的細胞被鑒定為CTC。本試劑盒對目標細胞特異性強、非常可靠的完成全血中CTC的鑒定。
水平轉子離心機（品牌：百泰克，型號：CK4050），15ml離心管，磁力架（百泰克），移液器，采血管。
恒溫培養(yǎng)箱，烘箱，熒光顯微鏡，暗盒。
按照人外周血循環(huán)腫瘤細胞差相富集試劑盒（品牌：百泰克，型號：CT1001/ CT1002）使用說明書操作。
按照人外周血循環(huán)腫瘤細胞鑒定試劑盒（免疫熒光法）（品牌：百泰克，型號：CT2001/ CT2002）使用說明書操作。
進行了6組重復試驗，細胞去除率如下表所示（表1），平均值96.13%。
進行了6組重復試驗，CTC回收率如下表所示（表2），平均值75.63%。
熒光顯微鏡或激光共聚焦下進行觀察并采集圖片，其中DAPI+/CK18+/CD45-的細胞即為CTC。
通過人外周血循環(huán)腫瘤細胞差相富集及鑒定試劑盒，可有限實現(xiàn)循環(huán)腫瘤細胞的富集及鑒定，具有平均回收率高、富集效果好、方法操作簡便及成本低等特點。
參考文獻：
[1]. Aceto N, Bardia A, Miyamoto D T, et al. Circulating tumor cell clusters are oligoclonal precursors of breast cancer metastasis[J]. Cell, 2014, 158(5):1110-1122.
[2]. Bottos A, Hynes N E. Cancer: Staying together on the road to metastasis[J]. Nature, 2014, 514(7522): 309-310..
[3]. Qian W, Zhang Y, Chen W. Capturing cancer: emerging microfluidic technologies for the capture and characterization of circulating tumor cells[J]. Small, 2015, 11(32): 3850-3872.
[4]. Hyun K A, Kwon K, Han H, et al. Microfluidic flow fractionation device forlabel-free isolation of circulating tumor cells (CTCs) from breast cancer patients[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2013, 40(1): 206-212..
[5]. Ozkumur E, Shah A M, Ciciliano J C, et al. Inertial focusing for tumor antigen dependent and independent sorting of rare circulating tumor cells[J]. Science translational medicine, 2013, 5(179): 179ra47-179ra47.
[6]. Miyamoto D T, Sequist L V, Lee R J. Circulating tumour cells [mdash] monitoring treatment response in prostate cancer[J]. Nature reviews Clinical oncology, 2014, 11(7): 401-412.
[7]. Toss A, Mu Z, Fernandez S, et al. CTC enumeration and characterization: moving toward personalized medicine[J]. Annals of translational medicine, 2014,2(11):108
[8]. van de Stolpe A, Pantel K, Sleijfer S, et al. Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use[J]. Cancer research, 2011, 71(18):5955-5960.
